· 临床研究 ·

肾上腺皮质癌及肾上腺皮质腺瘤患者 血清肾上腺皮质激素谱的特点比较

刘林’ 王聃妮’ 虢晶翠’ 张争’ 高莹’ 张俊清

北京大学第一医院内分泌科,北京100034;2北京大学第一医院泌尿外科,北京 100034

通信作者:张俊清,Email:junqing.zhang@pkufh.com

【摘要】 目的 比较肾上腺皮质癌及肾上腺皮质腺瘤患者血清肾上腺皮质激素谱的特点。 方法 回顾性分析2018年1月至2022年6月于北京大学第一医院内分泌科和(或)泌尿外科就诊的 肾上腺皮质癌患者23例、肾上腺皮质腺瘤患者119例,获取两组患者影像学特征,通过液相色谱串联 质谱方法检测两组患者血清肾上腺皮质激素谱,比较两组的差异,采用多因素 logistic 回归模型分析 与肾上腺皮质癌发生相关的可能因素。结果 肾上腺皮质癌患者的年龄为46(35,57)岁,女性为 15例(65.2%);肾上腺皮质腺瘤患者年龄为49(40,58)岁,女性为80例(67.2%);两组患者年龄及性别 构成差异无统计学意义(均P>0.05)。影像学检查发现,肾上腺皮质癌患者的肿瘤最大径M(Q1,Q3) (下同)为7.05(5.45,9.78)cm,比肾上腺皮质腺瘤患者大[2.1(1.6,3.0) cm](P<0.001);雄烯二酮 [4.056 9(1.619 5,7.907 9)比1.517 5(0.935 1,2.582 1) nmol/L(P<0.001)]升高,11-酮睾酮/11-酮雄烯二 酮 [0.034 3(0.020 6, 0.079 2)比0.041 0(0.028 6, 0.061 5) (P=0.089)]、11-酮雄烯二酮/11-羟雄烯二 酮 [0.013 0(0.006 4,0.086 7)比0.063 0(0.018 2,0.162 5)(P=0.042)]降低。多因素分析发现雄烯二 酮、肿瘤最大径、11-酮睾酮/11-酮雄烯二酮、11-酮雄烯二酮/11-羟雄烯二酮是发生肾上腺皮质癌的相 关因素,OR值(95%CI)分别为 1.841(1.0933.100)、5.130(2.33211.285)、0.381(0.1670.867)、 0.000(0.0000.014),均P<0.05。结论 肾上腺皮质肿瘤直径越大、雄烯二酮水平升高是肾上腺皮质 癌的相关因素;11-羟雄烯二酮转换生成11-酮雄烯二酮及11-酮雄烯二酮转换生成11-酮睾酮减低与 肾上腺皮质癌相关。

【关键词】 肾上腺皮质癌;肾上腺皮质腺瘤;肾上腺皮质激素谱;液相色谱-串联质谱 基金项目:国家重点研发计划(2022YFC2505300)

Preparcorticale LA

Comparison the characteristics of serum adrenocortical hormone profile in patients with adrenal cortical carcinoma and adrenal coritcal adenoma

Liu lin1, Wang Danni1, Guo Jingcui1, Zhang Zheng2, Gao Ying1, Zhang Junqing1

1Department of Endocrinology, Peking University First Hospital, Beijing 100034, China; 2Department of Urology, Peking University First Hospital, Beijing 100034, China

Corresponding author: Zhang Junqing, Email: junqing.zhang@pkufh.com

[ Abstract ] Objective To compare the characteristics of serum adrenocortical hormone profiles detected by liquid chromatography tandem mass spectrometry in patients with adrenal cortical carcinoma and adrenal adenoma. Methods A total of 23 patients with adrenal cortical carcinoma and 119 patients with adrenal cortical adenoma/hyperplasia who visited the Department of Endocrinology and/or the Department of Urology of Peking University First Hospital from January 2018 to June 2022 were analyzed retrospectively. The imaging characteristics and serum adrenal cortical hormone profiles detected by liquid chromatography tandem mass spectrometry were

本文编辑 梁明修

analyzed retrospectively. The independent related factors of adrenal cortical carcinoma were screened by univariate analysis and multivariate logistic regression analysis. Results The age of patients with adrenal cortical carcinoma was 46 (35, 57) years, and 15 (65.2%) were female; The age of adrenal cortical adenoma patients was 49 (40, 58) years old, and 80 (67.2%) were female. There was no significant difference in age and gender between the two groups (all P values>0.05). The maximum tumor diameter M (Q1, Q3) of patients with adrenocortical carcinoma was 7.05 (5.45, 9.78) cm, which was larger than that of patients with adrenocortical adenoma [2.1 (1.6, 3.0) cm] (P< 0.001). Compared with patients with adrenal adenoma, the androstenedione (AD) of patients with adrenal cortical carcinoma [4.056 9 (1.619 5, 7.907 9) nmol/L vs 1.517 5 (0.935 1, 2.582 1) nmol/L (P<0.001)] was significantly increased; 11-ketotestosterone/11-ketoandrostenedione [0.034 3 (0.020 6, 0.079 2) vs 0.041 0 (0.028 6, 0.061 5) (P=0.089)] and 11-ketoandrostenedione/ 11-hydroxyandrostenedione [0.013 0 (0.006 4, 0.086 7) vs 0.063 0 (0.018 2, 0.162 5) (P=0.042)] were significantly decreased. Multivariate analysis found that AD, the largest diameter of the tumor, 11-ketotestosterone/11-ketoandrostenedione and 11-ketoandrostenedione/11-hydroxyandrostenedi-one were related factors for adrenal cortical carcinoma, with OR values (95%CI) of 1.841 (1.093-3.100), 5.130 (2.332-11.285), 0.381 (0.167-0.867) and 0.000 (0.000-0.014), respectively, all P values <0.05. Conclusions The larger diameter of adrenal cortical tumor and the higher the level of androstenedione are independent risk factors for adrenal cortical carcinoma. The reduction conversion of 11-hydroxyandrostenedione to 11-ketoandrostenedione and 11-ketoandrostenedione to 11-ketotestosterone were independently associated with adrenal cortical carcinoma.

[ Key words ] Adrenocortical carcinoma; Adrenocortical adenoma; Adrenal cortical hormone profile; Liquid chromatography tandem mass spectrometry Fund program: National Key Research and Development Program of China (2022YFC2505300)

肾上腺皮质癌(adrenal cortical carcinoma, ACC)是一种极为罕见的神经内分泌系统恶性肿 瘤,仅占原发性肾上腺肿瘤的极小一部分,但预后 差,中位总生存期为3~4年,且缺乏有效的治疗方 案[1]。由于这种疾病的罕见性以及缺乏明显和特 异性的预警提示症状,ACC的早期诊断仍然是一个 很大的挑战。

CAL

ACC起源于肾上腺皮质细胞,但肿瘤有明显的 异质性,仍保留着不同程度的肾上腺皮质分化。 50%~60%的患者存在高皮质醇血症和(或)高雄激素 血症,一小部分患者有雌激素和(或)盐皮质激素过 量[1]。因此不同于分化更好的肾上腺皮质腺瘤/增生, ACC有着特征性的病理性类固醇生成信号。液相色 谱串联质谱相色谱串联质谱(liquid chromatography tandem mass spectrometry,LC-MS/MS)方法检测肾上 腺皮质激素谱,较传统化学发光法、酶联免疫吸附试 验、放射免疫分析方法灵敏性及特异性更高,更准确 地反映肾上腺皮质激素合成水平。因此本研究拟探 讨LC-MS/MS法检测肾上腺皮质激素谱在肾上腺皮 质疾病良恶性鉴别诊断中的价值。

对象与方法

一、研究对象

一医院内分泌科和(或)泌尿外科就诊的肾上腺皮 质肿瘤患者共142例,其中ACC 23例,良性肾上腺 皮质腺瘤119例。纳入标准:手术或活检病理明确 诊断ACC、肾上腺皮质腺瘤。排除标准:(1)正在服 用利尿剂、肾素-血管紧张素-醛固酮系统(renin angiotensin aldosterone system,RAAS)阻断剂、糖皮 质激素、性激素等药物的患者;(2)既往有癌症病史 或近期接受过大型手术、放疗或化疗等治疗的患 者;(3)合并肾功能不全患者;(4)拒绝参与本项目 的患者。本研究得到了北京大学第一医院伦理委 员会审核批准(批号:2017研93)。所有患者均在 取样前签署知情同意书。

二、研究方法

入院全部患者均有手术病理或活检病理结合 临床结局明确诊断ACC、肾上腺皮质腺瘤。全部患 者均进行了肾上腺CT、MRI检查,测定肾上腺肿瘤 最大直径。手术、药物或介入等治疗前晨起8: 00-9:00时立位采血,分离血清后-80°℃冰箱冻 存,送检北京金域医学检验中心采用LC-MS/MS方 法进行肾上腺皮质激素谱检测18羟皮质酮、醛固 酮、11脱氧皮质醇、皮质醇、18羟皮质醇、18氧皮质 醇、硫酸脱氢表雄酮、雄烯二酮、睾酮、双氢睾酮、 11羟雄烯二酮、11酮雄烯二酮、11羟睾酮、11-酮睾 酮、表睾酮、雄酮、表雄酮、雌酮。根据目前已知肾 上腺皮质激素合成路径计算相应质激素比值间接

反应皮质激素合成酶活性水平:皮质醇/11-脱氧皮 质醇、醛固酮/18羟皮质酮、11酮睾酮/11酮雄烯二 酮、雌酮/雄烯二酮、11羟雄烯二酮/雄烯二酮、11酮 雄烯二酮/11羟雄烯二酮、表睾酮/雄烯二酮。

三、统计学方法

采用SPSS 26.0 软件进行数据整理和统计学分 析。符合正态分布的计量资料采用x ±s 表示,两 组间比较采用独立样本t检验;非正态分布的计量 资料采用M(Q1,Q3)表示,两组间比较采用 Mann-Whitney U检验。分类变量采用例数(%)表 示,组间比较采用x2检验。采用多因素 logistic 回归 模型分析发生ACC的相关因素。双侧检验,检验 水准α=0.05。

结果 中华医

一、基本情况及临床资料

23例 ACC 患者的年龄为46(35,57)岁,女 性为15例(65.2%);119例良性肾上腺皮质腺

瘤患者年龄为49(40,58)岁,女性为 80例 (67.2%);两组年龄及性别构成差异均无统计 学意义。ACC患者的肿瘤最大径为7.05(5.45, 9.78)cm,比肾上腺皮质腺瘤患者大 [2.10(1.60,3.00)cm](P<0.001),ACC 组雄烯 二酮为 4.056 9(1.619 5,7.907 9)nmol/L,比肾 上腺皮质腺瘤组雄烯二酮[1.517 5(0.935 1, 2.582 1) nmol/L ](P<0.001)高,两组间其余临 床指标的比较情况详见表1。

二、肾上腺皮质激素比值间接评价肾上腺皮质 激素合成通路相关酶活性

皮质激素比值比方面,ACC患者11酮睾酮/ 11酮雄烯二酮 [0.034 3(0.020 6,0.079 2)比0.041 0 (0.028 6,0.061 5)(P=0.089)]和11 酮雄烯二酮/ 11 羟雄烯二酮 [0.013 0(0.006 4,0.086 7)比 0.063 0(0.018 2,0.162 5)(P=0.042)] 比良性肾上 腺皮质肿瘤患者低(表2)。

三、ACC发生的相关因素分析

肾上腺皮质激素进行共线性诊,对激素谱中明

表1 肾上腺皮质癌组和肾上腺皮质腺瘤组临床及激素谱特征比较
项目肾上腺皮质癌组(n=23)肾上腺皮质腺瘤组(n=119)x2/Z 值P值
女性“15(65.2)80(67.2)0.041.000
年龄(岁)46(35,57)49(40,58)-0.790.430
肿瘤最大径(cm)7.05(5.45,9.78)2.10(1.60,3.00)-6.77<0.001
ACTH(pg/ml)4.20(1.61,28.16)11.26(6.07,25.48)-0.990.322
18-OHB(nmol/L)0.709 7(0.492 0, 1.767 0)1.432 2(0.796 4, 2.526 6)-2.390.017
Aldo(nmol/L)0.077 4(0.051 9,0.179 5)0.234 3(0.104 9, 0.439 7)-3.200.001
18-OHF(nmol/L)1.809 8(1.119 1,4.269 4)3.208 7(1.966 1,5.519 1)-2.520.031
18-OF(nmol/L)0.030 3(0.016 5,0.113 1)0.056 6(0.028 4,0.226 3)-2.510.040
11-DOF(nmol/L)3.315 7(1.360 5,9.950 9)1.073 3(0.727 0,2.065 5)-4.43<0.001
F(nmol/L)376.60 (280.31,441.72)271.50(212.17,365.02)-3.040.002
AD(nmol/L)4.056 9(1.619 5, 7.907 9)1.517 5(0.935 1,2.582 1)-3.95<0.001
DHEAS(nmol/L)4 086.93(2 091.11, 10 857.90)1 384.68(661.81,3 135.48)-3.77<0.001
T(nmol/L)1.354 9(0.627 9,7.934 2)0.703 2(0.403 9, 10.828 5)-0.940.348
DHT(nmol/L)0.153 2(0.065 7,0.306 4)0.103 3(0.043 7,0.509 2)-0.740.460
E0(nmol/L)0.125 0(0.064 7,0.335 9)0.072 0(0.040 8,0.109 9)-3.360.001
11-OHAD(nmol/L)6.452 0(4.137 7,21.430 9)3.668 8(2.400 0,5.874 9)-3.370.001
11-KAD(nmol/L)0.759 6(0.407 5, 1.167 5)0.465 4(0.301 6,0.757 1)-2.270.023
11-OHT(nmol/L)0.361 4(0.172 1,0.716 7)0.246 0(0.149 8,0.346 6)-2.270.023
11-KT(nmol/L)0.598 2(0.433 5,1.117 8)0.694 6(0.428 8,0.997 4)-0.290.771
Andr(nmol/L)0.579 7(0.168 6, 1.237 1)0.270 3(0.137 4,0.468 8)-2.840.005
Epi-Andr(nmol/L)0.057 7(0.019 9,0.131 3)0.100 5(0.031 2,0.166 4)-1.130.257
Epi-T(nmol/L)0.116 9(0.021 1,0.172 0)0.082 4(0.026 7,0.284 3)-0.760.446

注:ACTH为促肾上腺皮质激素;18-OHB为18-羟皮质酮;Aldo为醛固酮;18-OHF为18-羟皮质醇;18OF为18-氧皮质醇;11-DOF为11-脱氧 皮质醇;F为皮质醇;AD为雄烯二酮;DHEAS为硫酸脱氢表雄酮;T为睾酮;DHT为双氢睾酮;EO为雌酮;11-OHAD为11-羟雄烯二酮;11-KAD 为11-酮雄烯二酮;11-OHT为11-羟睾酮;11-KT为11-酮睾酮;Andr为雄酮;Epi-Andr为表雄酮;Epi-T为表睾酮;“[例(%)],统计值为x2值,其余 项目均为M(Q1,Q3),统计值为Z值

表2 肾上腺皮质癌组和肾上腺皮质腺瘤组肾上腺皮质激素比值比较[M(Q1,Q3)]
项目肾上腺皮质癌组(n=23)肾上腺皮质腺瘤(n=119)Z值P值
F/11-DOF108.21(35.45,206.04)246.68(174.21,341.85)-4.18<0.001
Aldo/18-OHB0.123 7(0.072 6,0.244 3)0.161 6(0.101 6,0.241 8)0.520.600
11-KT/11-KAD0.034 3 (0.020 6, 0.079 2)0.041 0(0.028 6,0.061 5)-1.700.089
E0/AD1.823 3(1.399 1,3.206 2)2.709 4(1.400 4, 4.350 3)-0.910.362
11-OHAD/AD0.110 1(0.067 5,0.145 0)0.129 1(0.097 5,0.173 5)-1.180.239
11-KAD/11-OHAD0.013 0(0.006 4,0.086 7)0.063 0(0.018 2,0.162 5)-2.030.042
Epi-T/AD108.21(35.45,206.04)246.68 (174.22,341.85)-2.610.009

注:F为皮质醇;11-DOF为11 脱氧皮质醇;Aldo 为醛固酮;18-0HB为18羟皮质酮;11-KT为11-酮睾酮;11-KAD为11-酮雄烯二酮;E0为 雌酮;AD为雄烯二酮;11-OHAD为11-羟雄烯二酮;Epi-T为表睾酮

显共线性激素进行筛选后,以是否为 ACC 为因变 量,进行多因素 logistic 回归模型分析结果显示,调 整了肿瘤最大径、18羟皮质酮、醛固酮、11脱氧皮 质醇、皮质醇、雄烯二酮、硫酸脱氢表雄酮、双氢睾 酮、雌酮、11羟雄烯二酮、雄酮后,雄烯二酮水平、 肿瘤最大径是发生 ACC 的相关因素,OR 值 (95%CI)分别为 1.841(1.0933.100)、5.130(2.332 11.285),均P<0.05;调整了皮质醇/11脱氧皮质醇、 11酮睾酮/11酮雄烯二酮、11酮雄烯二酮/11羟雄烯 二酮、表睾酮/雄烯二酮后,11酮睾酮/11酮雄烯二 酮、11酮雄烯二酮/11羟雄烯二酮是ACC的相关因 素,OR 值(95%CI)分别为 0.381(0.1670.867)、 0.000(0.0000.014),均P<0.05。详见表3。

讨 论

ACC 是起源于肾上腺皮质细胞的恶性肿 瘤[14],年发病率每百万人口0.5~2例,该病临床罕 见、预后不良且异质性明显[5],目前临床应用较多 的病理诊断标准是 Weiss 标准[6],但仍有部分患者 至发生转移才能确诊,因此需要更准确的术前诊 断。目前国内外学者关注多组学研究对 ACC进行 新的分类以更好地预测临床预后及寻找潜在的治 疗靶点[2,7-11]。

肾上腺皮质可以合成分泌数十种类固醇激 素[12],随着质谱检测技术的进展,类固醇的生物合 成和代谢可反映在血清类固醇代谢组中,基于质谱 的类固醇代谢组学特征分析,可以鉴定与类固醇生 物合成和代谢障碍相关的独特多胆固醇代谢物特 征,对ACC的诊断、鉴别诊断和预后预测有着潜在 的重要意义[1]。在雄激素产生方面,研究者既往认 为肾上腺主要产生脱氢表雄酮、硫酸脱氢表雄酮和 雄烯二酮等活性雄激素的前体,但最近的研究表 明,肾上腺皮质也是具有强雄激素生物活性的类固 醇化合物的潜在来源[13],如睾酮、11β 羟睾酮和 11酮睾酮。目前认为肾上腺的雄激素生成至少有 包括经典雄激素合成通路、11氧雄激素合成和旁 路雄激素合成三条雄激素合成通路[14-15]。目前对 于肾上腺皮质疾病功能诊断尤其是皮质醇增多症 的分型诊断方面网状带雄激素表达水平的变化受 到了越来越多的关注,如 Eisenhofer 等[16]研究比较 不同亚型皮质醇增多症肾上腺皮质激素谱的差异, 相比健康对照肾上腺源性皮质醇增多症雄烯二酮 减低,促肾上腺皮质激素依赖性皮质醇增多症雄烯 二酮较健康对照升高,其中异源促肾上腺皮质激素 ACTH综合征雄烯二酮升高最为明显。Di Dalmazi 等[17]研究发现无功能腺瘤组比健康对照人群、亚临 床皮质醇增多症比无功能腺瘤组脱氢表雄酮、雄烯

表3 与肾上腺皮质癌发生相关的多因素 logistic 回归模型分析
因素β值SE值Wald x2值P值OR值(95%CI)
模型1
AD0.610.2665.260.0221.8410(1.093~3.100)
肿瘤最大径1.220.40224.17<0.0015.130(2.332~11.285)
模型2
11-KT/11-KAD-0.970.4205.290.0210.381(0.167~0.867)
11-KAD/11-OHAD-13.784.8438.090.0040.000(0.000~0.014)

注:AD为雄烯二酮;11-KT为11-酮睾酮;11-KAD为11-酮雄烯二酮;11-OHAD为11-羟雄烯二酮

中華苗字會杂志社

淑仪所有 违省必死

二酮水平明显减低,且临床上肾上腺皮质腺瘤所致 临床显性库欣与亚临床库欣相比硫酸脱氢表雄酮 减低更明显。本研究发现ACC患者多种网状带合 成激素明显升高,其中雄烯二酮与ACC患者的独 立相关因素,提示肾上腺网状带激素水平对于疾 病良恶性的鉴别诊断有一定的价值。

在ACC中肾上腺皮质分化的改变导致皮质类 固醇合成酶的功能改变从而可以表现出病理性类 固醇生成谱[18],国外有学者发现尿液THS等指标对 肾上腺疾病良恶性的鉴别有意义[19-2],也有学者结 合血清肾上腺皮质激素谱及人工智能进行ACC术 后复发检测优于影像学检查。本研究通过激素产 物/底物比值间接评价皮质类固醇合成酶活性发现 11酮睾酮/11酮雄烯二酮、11酮雄烯二酮/11羟雄烯 二酮比值的降低与 ACC独立相关,而11酮睾酮/ 11酮雄烯二酮、11酮雄烯二酮/11羟雄烯二酮可以 在一定程度上反映皮质类固醇合成过程中 17-βHSD和11-βHSD酶功能受到影响。

肿瘤直径是目前公认的 ACC的危险因素[22-24] 目前认为肿瘤直径超过4 cm需要警惕恶性可能, 且肿瘤体积与肾上腺皮质激素产生量相关,因此本 研究纳入分析CT或者核磁检查的肿瘤最大径,与 既往研究类似,本研究分析肿瘤最大径是ACC的 重要相关因素。

MEDICAL[11]

本研究存在的不足:(1)样本量小,ACC组样本 量仅23例;(2)本研究仅观察到肾上腺网状带雄激 素的异常表达可能与ACC相关,不能从发病机制 角度阐释。

[12]

综上,肾上腺网状带雄激素的异常表达对于肾 上腺皮质疾病的良恶性诊断存在一定的辅助意义。 利益冲突 所有作者均声明不存在利益冲突

作者贡献声明 刘林:设计实验、实施研究、采集数据、统计分析、 起草文章;王聃妮:标本采集、数据采集;虢晶翠:数据采集、数据 分析;张争、高莹:设计实验;张俊清:设计实验、论文稿件审阅、 指导

参 考 文 献

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中華醫學會杂志社 版权所有 违者必死

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中华

·读者·作者 ·编者 ·

本刊对来稿中统计学处理的有关要求

ON

1. 统计研究设计:应交代统计研究设计的名称和主要 做法。如调查设计(分为前瞻性、回顾性或横断面调查研 究);实验设计(应交代具体的设计类型,如自身配对设计、 成组设计、交叉设计、析因设计、正交设计等);临床试验设 计(应交代属于第几期临床试验,采用了何种盲法措施等)。 主要做法应围绕4个基本原则(随机、对照、重复、均衡)概要 说明,尤其要交代如何控制重要非试验因素的干扰和影响。

2. 资料的表达与描述:用x±s 表达近似服从正态分布的 定量资料,用M(QR)表达呈偏态分布的定量资料;用统计表 时,要合理安排纵横标目,并将数据的含义表达清楚;用统 计图时,所用统计图的类型应与资料性质相匹配,并使数轴 上刻度值的标法符合数学原则;用相对数时,分母不宜<20, 要注意区分百分率与百分比。

3. 统计分析方法的选择:对于定量资料,应根据所采 用的设计类型、资料所具备的条件和分析目的,选用合适的 统计分析方法,不应盲目套用t检验和单因素方差分析;对 于定性资料,应根据所采用的设计类型、定性变量的性质和

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频数所具备的条件以及分析目的,选用合适的统计分析方 法,不应盲目套用x2检验。对于回归分析,应结合专业知识 和散布图,选用合适的回归类型,不应盲目套用简单直线回 归分析,对具有重复实验数据的回归分析资料,不应简单化 处理;对于多因素、多指标资料,要在一元分析的基础上,尽 可能运用多元统计分析方法,以便对因素之间的交互作用 和多指标之间的内在联系进行全面、合理的解释和评价。

4. 统计结果的解释和表达:当P<0.05(或P<0.01)时,应 说明对比组之间的差异有统计学意义,而不应说对比组之 间具有显著性(或非常显著性)的差别;应写明所用统计分 析方法的具体名称(如:成组设计资料的t检验、两因素析因 设计资料的方差分析、多个均数之间两两比较的q检验等), 统计量的具体值(如t=3.45,x2=4.68,F=6.79等)应尽可能给 出具体的P值(如P=0.023);当涉及到总体参数(如总体均 数、总体率等)时,在给出显著性检验结果的同时,再给出 95%可信区间。

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